高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學(xué)實驗中常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計的。當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到1.05kg/cm2時，水蒸氣的溫度升高到121℃，經(jīng)15～30min，可全部殺死鍋內(nèi)物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標(biāo)本和工作服等都可應(yīng)用此法滅菌。
 

　　請注意高壓蒸汽滅菌的原理：是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計的。
 

　　壓力：100KPa，水蒸氣的溫度：115℃，時間：20min，各種微生物和它們的孢子
 

　　壓力：147KPa，水蒸氣的溫度：121℃，時間：15-30min，各種微生物和它們的孢子或芽孢
 

　　壓力：156KPa，水蒸氣的溫度：180℃，時間：4h，熱原質(zhì)(Pyrogen):熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖
 

　　壓力：156KPa，水蒸氣的溫度：250℃，時間：45min，熱原質(zhì)(Pyrogen):熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖
 

　　壓力：156KPa，水蒸氣的溫度：650℃，時間：1min，熱原質(zhì)(Pyrogen):熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖
 

　　溫度越高，需時越短，熱穿透能力越強(qiáng)。一般認(rèn)定115℃-121.3℃，對培養(yǎng)基的成分不產(chǎn)生破壞。
 

　　高壓蒸汽滅菌使用細(xì)節(jié)
 

　　高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否*極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當(dāng)水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。所以飽和蒸汽的滅菌更*！
 

　　一、高壓滅菌鍋使用前要水加到水位線；
 

　　二、將需滅菌的培養(yǎng)基、蒸餾水或其它器皿放入滅菌鍋內(nèi)，關(guān)閉鍋蓋，檢查排氣閥、安全閥狀態(tài)(上下排氣閥打開安全閥關(guān)合然后加熱，方便空氣排出，上、下排氣閥都同時處于開啟狀態(tài)待有水蒸汽從上、下閥溢出，此狀態(tài)保持7、8分鐘后，即排出空氣后上排氣閥關(guān)合，下排氣閥調(diào)小，安全閥保持關(guān)合狀態(tài))；
 

　　三、打開電源，檢查參數(shù)設(shè)置是否正確，然后按下“work”鍵，滅菌鍋開始工作；自動派冷氣，到105℃時，底部排氣閥門自動關(guān)閉，然后壓力開始上升；
 

　　四、壓力升至0.15MPa(121℃)時，滅菌鍋再次自動放氣，然后開始記時，一般培養(yǎng)基滅菌20min，蒸餾水滅菌30min；
 

　　五、達(dá)到規(guī)定的滅菌時間后，關(guān)閉電源，打開放氣閥緩慢放氣；當(dāng)壓力指針降至0.00MPa時，放氣閥無蒸汽排除時，方可開啟鍋蓋。
 

　　六、注意事項
 

　　1、汽未放盡前，不得開啟高壓鍋；
 

　　2、如果滅菌后的培養(yǎng)基在鍋內(nèi)不及時拿出，需在蒸汽放盡后將鍋蓋打開，切忌將培養(yǎng)基封閉在鍋內(nèi)過夜。
 

　　3、壓力表指針在0.05MPa以上時，不能過快放汽，以防止壓力急速下降，液體滾沸，從培養(yǎng)容器中溢出。
 

　　4、操作過程，請注意安全，小心燙傷。
 

　　在一個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下水的沸點是100攝氏度，壓力越高,與之對應(yīng)壓力下的沸點越高，這里是高壓蒸汽鍋,說明壓力肯定大于一個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓(通常情況下的地表面的大氣壓強(qiáng)就認(rèn)為是一個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓)，也就是說高壓蒸汽鍋肯定要超過100攝氏度才能沸騰，才能產(chǎn)生蒸汽。至少要等到水煮沸，排出一分鐘左右的蒸汽后再把安全閥關(guān)閉，這樣可以使高壓蒸汽鍋里的壓力迅速上升，原來沸騰的水因為壓力的快速上升而停止沸騰，壓力大，沸點高，水蒸汽就變成液體水，而放出大量的汽化潛熱，就是高溫高壓的目的，從而達(dá)到殺菌的目的。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：
 

　　一是濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；
 

　　二是濕熱的穿透力比干熱大；
 

　　三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100℃時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出2.26kJ(千焦)的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。
 

　　在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否*極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當(dāng)水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。要100度以上，也就是對應(yīng)壓力下的沸點后才能使水劇烈沸騰，將鍋內(nèi)空氣更多的排除。
 

　　高溫滅菌操作中常見錯誤的分析
 

　　高溫滅菌是指用熱能殺死微生物。其原理是高溫使原生質(zhì)中的蛋白質(zhì)變性、使酶失活，致使微生物死亡。高溫滅菌主要有高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法和灼燒滅菌法幾種。如果操作不當(dāng)，即達(dá)不到預(yù)期的滅菌效果。現(xiàn)就常見錯誤分析如下：
 

　　1、高壓蒸汽滅菌
 

　　蒸汽滅菌屬濕熱滅菌，由于濕熱滅菌有潛能存在，被滅菌物體的溫度比蒸汽的低，蒸汽在其表面凝結(jié)成水，放出潛能，可迅速提高被滅菌物體的溫度。又由于水和水蒸汽比空氣的熱容量大、導(dǎo)熱快、穿透力強(qiáng)，所以，與干熱滅菌相比，滅菌需要的溫度低、時間短。由于高壓蒸汽滅菌法水蒸汽的溫度隨其所受壓力的增加而升高，因而滅菌用的高溫蒸汽都是通過加壓獲得的。
 

　　手提式高壓滅菌鍋操作中常見的錯誤有：
 

　　(1)排氣不*。在升壓前應(yīng)將鍋內(nèi)冷空氣排凈，因空氣是熱不良導(dǎo)體，若不排凈，冷空氣就會聚集井滯留在滅菌鍋中消毒筒的中下部，圍繞在待滅菌物的周圍。在這種情況下，假若鍋內(nèi)僅排除一半空氣，當(dāng)壓力表指針達(dá)到105Pa時，鍋內(nèi)實際溫度僅能達(dá)到112℃，比要求的121℃低9℃之多，將導(dǎo)致滅菌不*，可能造成大面積染菌。(自動的高壓滅菌鍋上下排氣閥都要打開然后加熱排空氣)
 

　　(2)排氣軟管沒有按要求插入滅菌筒的下部，或排氣軟管斷裂、缺失。滅菌鍋內(nèi)的冷空氣是通過排氣軟管排出的，上述情況將造成滅菌筒外的蒸汽直接經(jīng)排氣閥排出鍋外，滅菌鍋內(nèi)的空氣排放受阻。
 

　　(3)消毒筒內(nèi)物品堆積太緊、太滿，阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內(nèi)升溫減慢，造成物體內(nèi)部殺菌不*。
 

　　(4)升溫過快。滅菌的時間是以達(dá)到要求溫度后的持續(xù)時間計算的，但溫度的升降過程同樣起到殺菌的作用，升降溫度過快會通過影響總的積溫而影響滅菌效果。另外，升溫過快，特別是使用外源蒸汽的情況下，會造成被滅菌物體內(nèi)部升溫滯后于壓力表指示溫度。
 

　　(5)滅菌的物體體積(容量)過大。組織培養(yǎng)中或常規(guī)微生物實驗中，高溫蒸汽滅菌通常要在121℃(即蒸汽壓力為1kg/c㎡或5磅/寸2，或0.105MPa)下保溫15min。這一規(guī)定僅適用于試管、三角瓶中小于200ml容量的。若體積太大，特別是固體培養(yǎng)基，會造成滅菌不*，應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時間。
 

　　(6)任意延長滅菌時間。規(guī)定的滅菌溫度和時間是經(jīng)過科學(xué)試驗確定的，只要按照正確的滅菌程序是能達(dá)到滅菌目的的。但在實踐中常有人為了“保證*滅菌”而任意延長滅菌時間。這樣忽視了殺菌過程中溫度對培養(yǎng)基成分的破壞作用，是得不償失的。
 

　　(7)溫度不穩(wěn)定。滅菌過程中溫度(壓力)忽高忽低，特別是手提式電能滅菌鍋，它沒有控溫裝置，難于控溫。操作者可配置調(diào)壓變壓器，通過調(diào)節(jié)電壓控溫。此外，還常遇到滅菌鍋內(nèi)加水太少(應(yīng)加2～3L)；容器內(nèi)裝的溶液量過多(應(yīng)少于2/3)；安全閥失靈等問題。
 

　　2、干熱滅菌
 

　　干熱滅菌指在烘箱160℃溫度下，維持2h，消除物體上的微生物的方法。常見錯誤有：
 

　　(1)將滅菌物品(如培養(yǎng)皿)堆摞放置，且堆得過滿、過擠，阻礙空氣流通和熱量的傳遞、交換；
 

　　(2)升溫時不打開箱頂通風(fēng)孔，影響箱內(nèi)冷空氣及水汽的排除；
 

　　(3)高溫(80℃以上)下開箱取物，熱蒸汽噴出造成燒傷及突然降溫，使玻璃器皿破裂；
 

　　(4)溫度過高(180℃以上)造成包裝紙、棉塞焦化，失去防菌或過濾作用；
 

　　(5)將不耐熱的槍頭、離心管、試管帽、濾器等塑料制品放入烤箱內(nèi)滅菌，而致熔化。
 

　　3、灼燒滅菌
 

　　即直接利用火焰將微生物灼燒致死。特點：簡便、迅速、*。主要用于接種工具及器皿的滅菌。如接種杯、鑷子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的鋁箔的滅菌常見的錯誤有：
 

　　(1)接種工具的滅菌范圍不夠，如長度不夠，灼燒時沒有旋轉(zhuǎn)造成內(nèi)外側(cè)滅菌不勻；
 

　　(2)接種工具沒有降至常溫即用于接種；
 

　　(3)對玻璃器皿灼燒過度，使棉塞、封口膜焦化或熔化。